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一、背景與儀器概述（約 250 字）

Thermo Scientific Applied?Biosystems 3500 系列 Sanger 測序/片段分析儀采用毛細(xì)管電泳技術(shù)，支持 8 通道（3500）或 24 通道（3500xL），兼具測序與片段分析功能。高度自動化設(shè)計，從樣品加載、儀器校準(zhǔn)、運(yùn)行維護(hù)到數(shù)據(jù)采集均實現(xiàn)智能化控制。平臺支持多種模塊如基因測序、STR 分型、微衛(wèi)星分析、LOH 及 SNP 驗證，具備易安裝耗材、RFID 追蹤、自動數(shù)據(jù)導(dǎo)出等功能，為遺傳研究和法醫(yī)生物識別提供高通量穩(wěn)定方案。

二、樣品類型與前處理（約 250 字）

3500 系列支持廣泛樣本類型輸入，包括：

• 基因組 DNA：5–50?ng 推薦輸入量；

• cDNA 或質(zhì)粒 DNA：建議 1–20?ng，用于克隆或表達(dá)分析；

• PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物：結(jié)合熒光標(biāo)記引物（如 FAM/VIC/NED/PET）定量濃度；

• STR 或法醫(yī)鑒定樣本：結(jié)合 Identifiler、GlobalFiler 等試劑盒；

• 片段分析產(chǎn)物：應(yīng)用于 microsatellite、LOH、AFLP、MLPA 分析。

所有樣本須經(jīng)過定量（如 Qubit/PicoGreen），清除抑制物（蛋白質(zhì)、鹽殘留），保持濃度在建議范圍內(nèi)。PCR 產(chǎn)物需進(jìn)行酶切或純化，確保峰形清晰、信噪比佳。

三、樣本板布局（約 200 字）

上機(jī)使用預(yù)制 96 孔板或小型片段分析片架。建議統(tǒng)一樣本排列、設(shè)置陰陽性對照。板布局支持通過 Data Collection 軟件導(dǎo)入預(yù)設(shè)模板，實現(xiàn)自動識別并追蹤樣品信息。填裝樣本后需貼上條形碼或 RFID 標(biāo)簽，與虛擬樣本庫對應(yīng)。

四、加載樣品—上機(jī)流程（約 200 字）

1. 插入板架：輕推到位；

2. 加注模板和緩沖液（含染料泊泊和緩沖液包）；

3. 蓋好板蓋，保持清潔；

4. 關(guān)閉運(yùn)行艙門；

5. 軟件提示確認(rèn)板號、樣本信息。

五、毛細(xì)管陣列與管徑設(shè)置（約 200 字）

系統(tǒng) 8 或 24 通道毛細(xì)管陣列預(yù)裝 POP-4 聚合物，支持 36?cm 或 50?cm 長。陣列帶 RFID 標(biāo)簽記錄使用次數(shù)（推薦 ≤160 注射次數(shù)），每孔注射體積 ≤1.2?μL。更換陣列需重新校準(zhǔn)。

六、運(yùn)行參數(shù)與方法輸入（約 250 字）

在 Data Collection 軟件設(shè)置：

• 注射電壓/時間：如 1.6?kV，5–15?秒；

• 分離電壓：一般設(shè) 15 kV；

• Oven 溫度：設(shè)定 60?°C 提升峰形穩(wěn)定；

• 運(yùn)行時間：35–60?分鐘，根據(jù)片段長度／分辨率；

• 染色方案：選擇 4–6～染料組別，如 G5-OSR/J6-OSR；

• OSR 特殊設(shè)定：打開 off?scale recovery（信號飽和可擴(kuò)展到 65K RFU）提高高濃DNA 檢測率。

七、試劑與緩沖液加注（約 200 字）

需要使用：

• 陰陽極緩沖液：由緩沖劑盒提供；

• POP-4 聚合物：隨機(jī)補(bǔ)充以維持填充量；

• Condition Reagent：用于陣列預(yù)處理；

• 氫氧化去離子水：用于沖洗和復(fù)填。

注入時務(wù)必避免氣泡，清理邊緣滴液，定期更換以維持電泳效率。

八、校準(zhǔn)與儀器啟動（約 250 字）

• 空間／光譜校準(zhǔn)：按安裝 SOP 自動運(yùn)行；

• 檢查 CCD 激光系統(tǒng)、熒光穩(wěn)定性、基線干擾；

• 軟件自動檢查耗材 RFID、緩沖容量、電力狀態(tài)；

• QC 通過后，點擊“Start Run”啟動運(yùn)行。

九、QC 標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)控（約 200 字）

運(yùn)行中實時監(jiān)控：

• 注射電流（uA）和電壓波動；

• 溫度曲線；

• 熒光強(qiáng)度（RFU）；

• E?PT 曲線：判斷運(yùn)行穩(wěn)定性；

• 異常報警：信號偏低、高電阻、緩沖量不足等即時提示。

十、常見問題處理（約 200 字）

• 低信號強(qiáng)度：檢查 DNA 濃度／PCR 產(chǎn)物純度；

• 注射失敗：更換毛細(xì)管陣列，檢查漏液或堵塞；

• 分辨率下降：清理膠體，重新校準(zhǔn)；

• 高背景噪聲：更換緩沖液，確認(rèn)環(huán)保裝置排風(fēng)；

• 數(shù)據(jù)偏差：核查系統(tǒng)校準(zhǔn)歷史、軟件升級狀態(tài)。

十一、數(shù)據(jù)采集與記錄（約 200 字）

運(yùn)行完成后軟件自動生成 .ab1 或 .hid 文件?？蛇x擇上傳 Thermo Fisher Connect 平臺，實現(xiàn)遠(yuǎn)程監(jiān)控、郵件通知、云存儲跟蹤。支持 21 CFR Part 11 自動審計、用戶權(quán)限控制、E?Signature。

十二、樣品通量與時間管理（約 200 字）

• 3500：約 96 注射/天 ×8 通道；

• 3500xL：24 通道，提升3倍通量；

• 操作時間包括：30?min 準(zhǔn)備 + 60?min 運(yùn)行 + 10?min 后處理 ≈100?min/批；

• 一天可提升至 10?批以上，約數(shù)百樣本輸出。

十三、清潔維護(hù)建議（約 200 字）

• 每次運(yùn)行后沖洗陣列、涂潤滑劑；

• 每周更換 POP-4 聚合物、緩沖溶液；

• 每月執(zhí)行空間/光譜校準(zhǔn)；

• 每季度更換注射器、屏蔽墊圈；

• 定期檢查電極、激光器穩(wěn)定性；

• 儀器艙保持干凈、干燥，防塵，避免潮氣腐蝕。

十四、操作標(biāo)準(zhǔn)化（約 150 字）

• 制定 SOP，培訓(xùn)操作員；

• 樣品編號嚴(yán)格統(tǒng)一；

• 實驗日志記錄，包括試劑批號、耗材周期、運(yùn)行異常；

• 鏈接 LIMS 系統(tǒng)，電子數(shù)據(jù)審計與文件歸檔。

十五、總結(jié)（約 200 字）

3500/3500xL 系統(tǒng)通過以下優(yōu)勢實現(xiàn)高效樣品輸入與數(shù)據(jù)產(chǎn)出：

• 支持廣泛樣本類型，滿足基因組、片段分析等需求；

• 自動化流程—從上樣至數(shù)據(jù)采集全鏈條集成；

• 靈活方法設(shè)置—注射、電壓、溫度、染料組合可調(diào)；

• 高通量與高分辨率并重；

• QC 與校準(zhǔn)機(jī)制完善，確保實驗可靠性；

• 遠(yuǎn)程監(jiān)控與審計功能，適合規(guī)范實驗室管理。

通過規(guī)范操作、及時維護(hù)及數(shù)據(jù)管理，系統(tǒng)可持續(xù)實現(xiàn)高質(zhì)量輸出，適用于科研、法醫(yī)、臨檢等多種實驗應(yīng)用。