樣品的正確選擇和適當(dāng)?shù)娜萜鳒?zhǔn)備是分光光度法實(shí)驗(yàn)的第一步。GENESYS 180分光光度計(jì)能夠?qū)Χ喾N類型的樣品進(jìn)行測(cè)量,包括液體、固體和薄膜等。為了確保測(cè)量數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,必須對(duì)樣品進(jìn)行精確的準(zhǔn)備。
GENESYS 180可用于測(cè)量多種樣品類型,常見(jiàn)的樣品包括:
液體樣品:這是最常見(jiàn)的分光光度計(jì)應(yīng)用之一,液體樣品可以是溶液、懸浮液、或者是細(xì)胞和組織懸液等。液體樣品通常要求一定濃度,并且需要均勻混合,以確保準(zhǔn)確的吸光度測(cè)量。
固體樣品:固體樣品在使用分光光度計(jì)時(shí)通常需要制成薄膜或通過(guò)溶解后變?yōu)槿芤?。例如,染料、涂料、薄膜等樣品可以通過(guò)將其溶解在適當(dāng)溶劑中來(lái)進(jìn)行測(cè)量。
薄膜樣品:薄膜樣品可以直接放置在樣品托盤中進(jìn)行測(cè)量,特別適用于透過(guò)光學(xué)信號(hào)較強(qiáng)的薄膜材料。此類樣品通常用于分析薄膜材料的光學(xué)性質(zhì)。
樣品容器的選擇對(duì)于測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。在使用GENESYS 180進(jìn)行分光光度測(cè)量時(shí),通常使用透明的比色皿(如10mm長(zhǎng)度的比色皿)。比色皿的材質(zhì)應(yīng)該與測(cè)量波長(zhǎng)范圍相匹配,常見(jiàn)的比色皿材質(zhì)包括:
光學(xué)玻璃:適用于可見(jiàn)光和紫外光的測(cè)量,具有良好的透光性和穩(wěn)定性。
石英:適用于紫外光范圍,尤其是在低于350nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi),石英比玻璃具有更好的透光性。
塑料或其他透明材料:適用于不需要高精度的測(cè)量,通常用于教育或低預(yù)算的實(shí)驗(yàn)中。
比色皿的清潔是確保測(cè)量準(zhǔn)確性的關(guān)鍵步驟。容器在每次使用后都必須徹底清潔,以避免樣品殘留物或污漬影響測(cè)量結(jié)果。清潔時(shí)應(yīng)使用無(wú)塵軟布和適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行擦拭,避免使用會(huì)與樣品反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)。
對(duì)于液體樣品,準(zhǔn)備工作通常包括樣品的溶解、稀釋和混合。對(duì)于高濃度樣品,通常需要進(jìn)行稀釋以確保吸光度在儀器的線性范圍內(nèi)。以下是液體樣品處理的基本步驟:
溶解:確保樣品完全溶解,避免出現(xiàn)懸浮物或不溶解的顆粒,這些顆粒會(huì)影響光線的傳播和測(cè)量。
稀釋:對(duì)于濃度較高的樣品,使用合適的溶劑(如水、醇類或其他有機(jī)溶劑)進(jìn)行稀釋,稀釋倍數(shù)應(yīng)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍來(lái)調(diào)整。稀釋后應(yīng)再次混合均勻,確保樣品的濃度均勻分布。
混合均勻:液體樣品應(yīng)充分混合,避免液體的不均勻性導(dǎo)致測(cè)量誤差。使用旋渦混合器等設(shè)備可以確保樣品的均勻性。
對(duì)于固體樣品,常見(jiàn)的處理方法是將樣品溶解在合適的溶劑中,或者將固體樣品制成薄膜進(jìn)行測(cè)量。固體樣品的處理通常需要較為細(xì)致的準(zhǔn)備步驟:
溶解:將固體樣品加入溶劑中,確保樣品完全溶解。對(duì)于難溶于溶劑的物質(zhì),可以通過(guò)加熱或超聲波處理來(lái)促進(jìn)溶解過(guò)程。
制備薄膜:某些固體樣品(如薄膜、薄片等)可以直接放置在樣品托盤中進(jìn)行測(cè)量。這些薄膜樣品通常要求均勻的厚度,以確保吸光度測(cè)量的準(zhǔn)確性。
均勻分散:對(duì)于懸浮液樣品,確保固體粒子均勻分散在溶劑中,避免顆粒的聚集或沉淀,這樣可以確保每次測(cè)量的數(shù)據(jù)一致性。
有些樣品可能會(huì)因?yàn)槠鋸?fù)雜的化學(xué)成分而需要進(jìn)行特殊處理。例如,血液樣品、土壤樣品等可能含有雜質(zhì)或固體顆粒,因此在測(cè)量前需要經(jīng)過(guò)過(guò)濾、離心、稀釋等步驟進(jìn)行預(yù)處理。常見(jiàn)的預(yù)處理方法包括:
離心:對(duì)于液體樣品中的懸浮物,使用離心機(jī)去除不溶性顆?;螂s質(zhì)。
過(guò)濾:使用濾紙或?yàn)V膜過(guò)濾樣品,以去除不溶物或固體雜質(zhì)。
超聲波處理:對(duì)于需要高效溶解的樣品,使用超聲波清洗或處理設(shè)備幫助樣品溶解或分散。
在進(jìn)行樣品測(cè)量前,必須設(shè)置空白樣品(即僅含溶劑的樣品)進(jìn)行基線校準(zhǔn)??瞻讟悠返脑O(shè)置用于消除溶劑或容器本身對(duì)光的吸收。通過(guò)將空白樣品的光譜作為基線,GENESYS 180能夠精確測(cè)量樣品對(duì)光的吸收變化。
GENESYS 180的波長(zhǎng)范圍為190 nm至1100 nm,涵蓋了紫外光(UV)和可見(jiàn)光(VIS)區(qū)。在測(cè)量時(shí),應(yīng)根據(jù)樣品的吸光特性選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)范圍。例如,對(duì)于蛋白質(zhì)和DNA的測(cè)量,通常選擇260 nm和280 nm波長(zhǎng)點(diǎn);而在色素分析中,常常使用可見(jiàn)光波段。合理選擇波長(zhǎng)范圍可以提高實(shí)驗(yàn)效率并避免無(wú)關(guān)的光譜干擾。
GENESYS 180采用氘燈和鎢燈雙光源系統(tǒng),根據(jù)波長(zhǎng)范圍自動(dòng)切換光源。當(dāng)波長(zhǎng)在紫外光范圍(190 nm至400 nm)時(shí),儀器使用氘燈;當(dāng)波長(zhǎng)在可見(jiàn)光范圍(400 nm至1100 nm)時(shí),使用鎢燈。用戶無(wú)需手動(dòng)切換,儀器會(huì)自動(dòng)判斷并切換光源。
當(dāng)樣品濃度過(guò)高時(shí),可能會(huì)導(dǎo)致光線的吸收過(guò)強(qiáng),出現(xiàn)光信號(hào)飽和,導(dǎo)致測(cè)量結(jié)果失真。為避免這種情況,應(yīng)根據(jù)儀器的線性范圍調(diào)整樣品濃度。如果測(cè)量結(jié)果超出儀器的量程,應(yīng)通過(guò)稀釋樣品來(lái)重新測(cè)量。
對(duì)于濃度測(cè)量,GENESYS 180允許用戶使用標(biāo)準(zhǔn)樣品生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線通過(guò)已知濃度的樣品測(cè)定吸光度值,并繪制濃度-吸光度曲線。根據(jù)該曲線,可以計(jì)算未知樣品的濃度。在標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時(shí),確保使用多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品,以獲得精確的結(jié)果。
GENESYS 180提供了強(qiáng)大的數(shù)據(jù)擬合功能,能夠根據(jù)吸光度數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸,并計(jì)算樣品的濃度。通過(guò)最小二乘法等算法,儀器能夠生成最佳擬合曲線,幫助用戶準(zhǔn)確計(jì)算樣品濃度。
在某些情況下,樣品可能由于不均勻或其他因素導(dǎo)致數(shù)據(jù)波動(dòng)。GENESYS 180允許用戶進(jìn)行多次測(cè)量,并將結(jié)果進(jìn)行平均,以提高數(shù)據(jù)的可靠性。特別是在測(cè)量反應(yīng)速度、穩(wěn)定性等時(shí),進(jìn)行多次測(cè)量并取平均值是減少誤差的有效手段。
賽默飛GENESYS 180分光光度計(jì)是一款高性能的分析儀器,廣泛用于液體、固體和薄膜樣品的光譜分析。通過(guò)合理的樣品處理和準(zhǔn)備,可以確保測(cè)量數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和一致性。正確選擇樣品容器、保證樣品的均勻性、避免樣品濃度過(guò)高或過(guò)低、合理設(shè)置波長(zhǎng)范圍等,都是提高實(shí)驗(yàn)精度和數(shù)據(jù)可靠性的重要步驟。通過(guò)遵循這些操作規(guī)范,用戶能夠充分發(fā)揮GENESYS 180的優(yōu)勢(shì),獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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