BioMate 160是賽默飛公司推出的一款高性能紫外-可見分光光度計(jì),具有波長范圍廣、檢測靈敏度高、操作便捷等優(yōu)勢。儀器不僅能滿足常規(guī)吸光度和透過率的測定,還能實(shí)現(xiàn)DNA/RNA濃度檢測、蛋白分析、動(dòng)力學(xué)反應(yīng)監(jiān)測和多組分定量分析等應(yīng)用。要獲得準(zhǔn)確可靠的結(jié)果,科學(xué)合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)置至關(guān)重要。
溫度控制:實(shí)驗(yàn)室溫度保持在20~25℃,避免劇烈波動(dòng)。
濕度要求:相對(duì)濕度控制在60%以下,防止光學(xué)系統(tǒng)受潮。
光照條件:遠(yuǎn)離強(qiáng)光直射,避免外部光干擾檢測。
防震措施:儀器應(yīng)放置在穩(wěn)定臺(tái)面,避免震動(dòng)引起光路不穩(wěn)。
電源電壓保持在220V±10%。
避免與大功率設(shè)備同一電源回路,減少電磁干擾。
打開電源后至少預(yù)熱15分鐘。
執(zhí)行自檢程序,確保光源、波長和檢測器正常。
樣品需經(jīng)過適當(dāng)稀釋,保證吸光度在0.2~1.0之間。
紫外區(qū)使用石英比色皿,可見區(qū)使用光學(xué)玻璃比色皿。
比色皿透光面需潔凈、無水痕或指紋。
單波長測定:輸入目標(biāo)波長,如核酸測定常用260 nm。
多波長測定:輸入多個(gè)特征吸收峰波長,用于多組分分析。
掃描范圍:設(shè)定起止波長與步長,如200~800 nm,步長1 nm。
吸光度模式(Abs):適合溶液濃度與吸收峰強(qiáng)度的關(guān)系研究。
透過率模式(T%):用于檢測光透過率。
濃度模式(Conc):結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分析。
動(dòng)力學(xué)模式(Kinetics):實(shí)時(shí)監(jiān)測反應(yīng)過程。
氘燈:適合200~350 nm紫外區(qū)。
鎢燈:適合350~800 nm可見區(qū)。
自動(dòng)切換:根據(jù)波長范圍由系統(tǒng)自動(dòng)切換。
使用溶劑作為空白,在設(shè)定波長下進(jìn)行零點(diǎn)校正。
保證測量數(shù)據(jù)排除了溶劑和比色皿吸收的影響。
波長選擇:260 nm(核酸)、280 nm(蛋白)、230 nm(有機(jī)物雜質(zhì))。
計(jì)算方式:儀器自動(dòng)給出260/280比值和260/230比值。
樣品稀釋:確保A260值在0.2~1.0范圍內(nèi)。
保存格式:數(shù)據(jù)可導(dǎo)出為CSV或圖形曲線。
常用方法:考馬斯亮藍(lán)法、Lowry法、雙縮脲法。
波長設(shè)定:一般選擇595 nm(考馬斯亮藍(lán)法)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線設(shè)置:輸入標(biāo)準(zhǔn)品濃度與對(duì)應(yīng)吸光度,建立曲線。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理:自動(dòng)計(jì)算樣品濃度。
測量間隔:根據(jù)反應(yīng)速度設(shè)定,如每隔10秒采集一次。
測量時(shí)間:可設(shè)定幾分鐘到幾小時(shí)。
溫控條件:若配有溫控附件,可保持恒溫。
輸出結(jié)果:儀器實(shí)時(shí)繪制曲線,輸出速率常數(shù)等數(shù)據(jù)。
掃描范圍:如200~800 nm。
步長選擇:1 nm或更小。
掃描速度:快速掃描用于樣品預(yù)覽,慢速掃描提高分辨率。
結(jié)果輸出:生成光譜曲線,可用于峰值位置和形狀分析。
波長選擇:輸入各組分特征波長。
矩陣輸入:預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度矩陣。
自動(dòng)計(jì)算:儀器通過線性代數(shù)方法分離不同組分濃度。
內(nèi)部存儲(chǔ):適合短期保存。
U盤導(dǎo)出:適合長期保存和后期分析。
格式示例:20250818_SampleA_DNA260nm
包含日期、樣品編號(hào)和實(shí)驗(yàn)類型,方便溯源。
數(shù)據(jù)文件:CSV格式,便于統(tǒng)計(jì)軟件處理。
圖像文件:JPG或PDF,用于報(bào)告和展示。
比色皿方向一致:始終保持一致的放置方向,避免光程差異。
避免氣泡干擾:上樣時(shí)注意排除氣泡。
樣品混勻:測量前需充分混勻,避免分層。
樣品濃度控制:吸光度超過1.5需稀釋后再測。
重復(fù)性驗(yàn)證:重要樣品至少測三次,取平均值。
基線漂移:應(yīng)延長預(yù)熱時(shí)間或檢查光源。
波長偏移:通過標(biāo)準(zhǔn)濾光片校準(zhǔn)波長。
吸光度不穩(wěn)定:檢查比色皿是否清潔或是否有氣泡。
信號(hào)噪音大:檢查環(huán)境是否有電磁干擾。
退出程序:完成實(shí)驗(yàn)后退出當(dāng)前測量模式。
數(shù)據(jù)備份:確認(rèn)數(shù)據(jù)已保存至外部存儲(chǔ)。
光源關(guān)閉:若無實(shí)驗(yàn)需立即關(guān)機(jī),延長光源壽命。
比色皿清理:用去離子水沖洗干凈,擦干保存。
合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)置不僅保證了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,還能提升實(shí)驗(yàn)效率,避免重復(fù)操作帶來的資源浪費(fèi)。同時(shí),良好的實(shí)驗(yàn)設(shè)置習(xí)慣也能減少人為誤差,讓BioMate 160的性能得到充分發(fā)揮。
賽默飛BioMate 160分光光度計(jì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)置涵蓋了環(huán)境條件、電源檢查、波長選擇、模式設(shè)定、空白校正、標(biāo)準(zhǔn)曲線建立、數(shù)據(jù)保存及誤差調(diào)整等多個(gè)方面。不同實(shí)驗(yàn)類型需要不同的設(shè)置方案,但核心原則始終是標(biāo)準(zhǔn)化、精確化和規(guī)范化。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)在日常操作中不斷積累經(jīng)驗(yàn),形成適合自身研究方向的設(shè)置模板,從而在科研與檢測工作中取得高效、可靠的成果。