賽默飛分光光度計(jì)BioMate 160校正步驟詳解

一、引言

在分光光度分析中，儀器的校正是確保測(cè)量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。賽默飛分光光度計(jì)BioMate 160作為一款精密的紫外-可見分光光度計(jì)，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、化學(xué)、環(huán)境和制藥等領(lǐng)域。由于實(shí)驗(yàn)樣品濃度往往需要通過微小吸收差異來判斷，如果儀器未經(jīng)過嚴(yán)格校正，就可能導(dǎo)致結(jié)果偏差，甚至影響實(shí)驗(yàn)結(jié)論。因此，定期和規(guī)范的校正是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制體系的重要組成部分。

二、校正的基本意義

1. 保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性：通過校正消除儀器本身的誤差，確保吸光度和波長(zhǎng)讀數(shù)與真實(shí)值一致。

2. 維持儀器穩(wěn)定性：長(zhǎng)期使用后，光源衰減、光柵位置偏移、檢測(cè)器響應(yīng)變化等都會(huì)導(dǎo)致測(cè)量誤差，校正能夠恢復(fù)穩(wěn)定性。

3. 符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范：多數(shù)檢測(cè)方法和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求在樣品檢測(cè)前必須進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，以確保結(jié)果的可比性。

4. 提高實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性：校正能減少不同批次實(shí)驗(yàn)之間的系統(tǒng)誤差，使結(jié)果更具一致性。

三、BioMate 160的校正類型

賽默飛BioMate 160分光光度計(jì)通常涉及以下幾類校正：

1. 波長(zhǎng)校正

• 目的：確保光柵輸出的單色光波長(zhǎng)與儀器顯示的波長(zhǎng)一致。

• 方法：利用已知吸收峰的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如氫氧化釹濾光片、全程校正標(biāo)準(zhǔn)溶液）。

2. 吸光度校正

• 目的：確保儀器的吸光度測(cè)量與理論值或標(biāo)準(zhǔn)參考一致。

• 方法：通過校正標(biāo)準(zhǔn)濾光片或標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行。

3. 基線校正

• 目的：校正系統(tǒng)噪聲與背景吸收，保證測(cè)量以零點(diǎn)為參考。

• 方法：在無樣品比色皿或空白溶液條件下執(zhí)行。

4. 光度線性校正

• 目的：驗(yàn)證儀器在不同濃度區(qū)間內(nèi)的吸光度響應(yīng)是否保持線性。

• 方法：使用一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)量。

5. 雜散光校正

• 目的：去除非目標(biāo)波長(zhǎng)光對(duì)測(cè)量的干擾。

• 方法：采用特定濾光片或標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測(cè)雜散光并進(jìn)行修正。

四、校正前的準(zhǔn)備工作

1. 儀器準(zhǔn)備

• 確認(rèn)BioMate 160已經(jīng)預(yù)熱（通常需預(yù)熱30分鐘），保證光源穩(wěn)定。

• 檢查光源壽命指示，若氘燈或鎢鹵素?zé)羰褂脮r(shí)間過長(zhǎng)，應(yīng)考慮更換。

• 確認(rèn)比色皿室清潔，無灰塵或溶液殘留。

2. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與工具準(zhǔn)備

• 波長(zhǎng)校正濾光片（如氫氧化釹濾片、鈥氧化物濾片）。

• 吸光度校正濾光片（中性濾光片或鈷、鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液）。

• 高純水或?qū)嶒?yàn)要求的空白溶液。

• 干凈的石英比色皿。

3. 軟件與模式準(zhǔn)備

• 打開BioMate 160操作界面，進(jìn)入“校正”或“驗(yàn)證”功能模塊。

• 選擇所需校正項(xiàng)目，確認(rèn)參數(shù)范圍。

五、詳細(xì)校正步驟

1. 波長(zhǎng)校正步驟

1. 打開儀器并預(yù)熱。

2. 將氫氧化釹濾光片放入比色皿架。

3. 設(shè)定掃描范圍（200–800 nm）。

4. 執(zhí)行掃描，記錄濾光片吸收峰。

5. 將實(shí)測(cè)吸收峰位置與標(biāo)準(zhǔn)參考波長(zhǎng)（如279.4 nm、362.0 nm、585.2 nm等）對(duì)比。

6. 若偏差超出允許范圍（通?！? nm），則調(diào)整或重新校正。

2. 吸光度校正步驟

1. 放置空比色皿，執(zhí)行基線校正。

2. 將標(biāo)準(zhǔn)中性濾光片置于光路中。

3. 測(cè)量其在指定波長(zhǎng)下的吸光度。

4. 與濾光片標(biāo)定值比較，若差異超限則校正系統(tǒng)光度因子。

3. 基線校正步驟

1. 在比色皿架中放置裝有溶劑的比色皿作為空白。

2. 設(shè)定目標(biāo)波長(zhǎng)或全波段掃描。

3. 執(zhí)行“零點(diǎn)調(diào)整”功能，使儀器輸出的吸光度曲線在基線上接近于零。

4. 光度線性校正步驟

1. 配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（如重鉻酸鉀）。

2. 分別測(cè)量其在特定波長(zhǎng)下的吸光度。

3. 繪制濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4. 驗(yàn)證曲線是否保持良好線性（R2 ≥ 0.999為佳）。

5. 雜散光校正步驟

1. 選取對(duì)特定波長(zhǎng)光高度吸收的溶液（如氯化鈉溶液）。

2. 在該波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)量。

3. 如果檢測(cè)到透過光強(qiáng)度大于零，說明存在雜散光，需要校正光路。

六、注意事項(xiàng)

1. 比色皿清潔：使用前需用去離子水沖洗并擦干，避免指紋和殘液造成干擾。

2. 操作規(guī)范：插入濾光片和比色皿時(shí)動(dòng)作輕柔，避免刮傷。

3. 環(huán)境條件：避免在強(qiáng)光直射、溫濕度過高的環(huán)境下校正。

4. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保存：濾光片和標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)妥善保存，避免老化或污染。

5. 數(shù)據(jù)記錄：每次校正結(jié)果應(yīng)記錄存檔，以便追蹤和審核。

七、常見問題與排查

1. 波長(zhǎng)偏差大：可能由光柵機(jī)械結(jié)構(gòu)松動(dòng)或?yàn)V光片老化引起，應(yīng)檢查并更換。

2. 吸光度不穩(wěn)定：可能因光源燈管壽命接近極限或比色皿污染，應(yīng)及時(shí)維護(hù)。

3. 基線漂移：檢查光源預(yù)熱是否充分，以及樣品室是否清潔。

4. 線性不佳：可能因標(biāo)準(zhǔn)溶液配制誤差或比色皿光程不一致導(dǎo)致。

5. 雜散光高：需要清潔光學(xué)系統(tǒng)或聯(lián)系廠家維修。

八、定期維護(hù)與校正周期

1. 每日：進(jìn)行基線校正與空白檢查。

2. 每周：進(jìn)行波長(zhǎng)和吸光度驗(yàn)證。

3. 每月：完成光度線性和雜散光檢測(cè)。

4. 每半年或一年：進(jìn)行全面校正，必要時(shí)請(qǐng)專業(yè)工程師維護(hù)。

九、應(yīng)用實(shí)例

1. 核酸定量：在檢測(cè)DNA/RNA濃度前，需先進(jìn)行波長(zhǎng)與基線校正，確保260 nm的準(zhǔn)確性。

2. 蛋白質(zhì)分析：吸光度校正保證280 nm處的讀數(shù)可靠，避免濃度計(jì)算偏差。

3. 水質(zhì)檢測(cè)：光度線性校正有助于確保低濃度污染物檢測(cè)的靈敏度。

十、總結(jié)

賽默飛分光光度計(jì)BioMate 160的校正步驟涵蓋了波長(zhǎng)、吸光度、基線、光度線性和雜散光等多個(gè)環(huán)節(jié)。嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行校正，可以有效保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性。校正不僅是一種操作程序，更是質(zhì)量控制的核心環(huán)節(jié)。通過科學(xué)的校正管理和定期維護(hù)，BioMate 160能夠長(zhǎng)期保持最佳性能，為科學(xué)研究與應(yīng)用檢測(cè)提供可靠的保障。