分光光度計(jì)(Spectrophotometer)是一種能夠通過(guò)測(cè)量樣品對(duì)光的吸收程度來(lái)分析樣品特性、濃度以及成分的儀器。其基本原理基于光的吸收定律,即比爾-蘭伯特定律(Beer-Lambert Law)。這一定律表明,光通過(guò)吸光物質(zhì)時(shí),吸光度(Absorbance, A)與樣品的濃度(c)、樣品的光路徑長(zhǎng)度(l)以及該物質(zhì)在特定波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)(ε)成正比:
A=ε?c?lA = \varepsilon \cdot c \cdot lA=ε?c?l
在分光光度計(jì)中,光源發(fā)出的光通過(guò)分光器分解成不同波長(zhǎng)的光線。樣品吸收不同波長(zhǎng)的光,而剩余的光則通過(guò)光電探測(cè)器測(cè)量,最終計(jì)算出吸光度值,并通過(guò)儀器內(nèi)部的計(jì)算與數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)來(lái)輸出相應(yīng)的結(jié)果。
賽默飛GENESYS 180分光光度計(jì)采用了上述分光光度計(jì)原理,且在設(shè)計(jì)上做了許多創(chuàng)新,以提供高精度和易操作的功能。其核心工作原理可分為以下幾個(gè)主要步驟:
GENESYS 180配備了高穩(wěn)定性的光源,通常采用氘燈(D2)和鎢燈(W)作為光源。氘燈主要用于紫外區(qū)(200-400 nm),而鎢燈則用于可見光區(qū)(400-1100 nm)。當(dāng)儀器啟動(dòng)時(shí),光源發(fā)出一束白光(全光譜光),該光經(jīng)過(guò)分光系統(tǒng)進(jìn)行分離,產(chǎn)生不同波長(zhǎng)的單色光。
光源發(fā)出的光通過(guò)光學(xué)分光系統(tǒng),這個(gè)系統(tǒng)的功能是將不同波長(zhǎng)的光分開并選擇特定波長(zhǎng)的光線。GENESYS 180采用了光柵或?yàn)V光片等設(shè)備來(lái)實(shí)現(xiàn)分光。通過(guò)旋轉(zhuǎn)或調(diào)整這些裝置,儀器可以選擇所需的波長(zhǎng)并讓其通過(guò)樣品。
經(jīng)過(guò)分光系統(tǒng)后,特定波長(zhǎng)的光線通過(guò)樣品池,照射到樣品中。樣品對(duì)光的吸收依賴于其組成成分。當(dāng)光通過(guò)樣品時(shí),樣品內(nèi)的分子、原子或化合物會(huì)吸收特定波長(zhǎng)的光能量,這取決于樣品中的物質(zhì)以及該物質(zhì)在該波長(zhǎng)下的吸收特性。
經(jīng)過(guò)樣品吸收后的光進(jìn)入光電探測(cè)器。該探測(cè)器將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)。常見的光電探測(cè)器有光電二極管(Photodiode)或光電倍增管(Photomultiplier Tube, PMT),它們能夠高效地將入射光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電流信號(hào),并且具有較高的靈敏度。
電信號(hào)經(jīng)過(guò)放大后傳輸?shù)絻x器內(nèi)的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)。系統(tǒng)根據(jù)吸光度公式,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線或已知物質(zhì)的吸光系數(shù),計(jì)算出樣品的濃度或其他相關(guān)參數(shù)。最終,計(jì)算結(jié)果被轉(zhuǎn)換成數(shù)字化的數(shù)據(jù)或圖表形式,顯示在儀器的屏幕上,供實(shí)驗(yàn)者分析和記錄。
比爾-蘭伯特定律是分光光度計(jì)原理的基石,其公式為:
A=ε?c?lA = \varepsilon \cdot c \cdot lA=ε?c?l
其中:
AAA 是樣品的吸光度;
ε\varepsilonε 是物質(zhì)在特定波長(zhǎng)下的摩爾吸光系數(shù),單位為L(zhǎng)·mol?1·cm?1;
ccc 是樣品的濃度,單位為mol/L;
lll 是光程長(zhǎng)度(樣品池的厚度),單位為cm。
該定律的應(yīng)用意味著吸光度與物質(zhì)濃度、樣品池的厚度(光程長(zhǎng)度)及該物質(zhì)的吸光特性之間存在線性關(guān)系。通過(guò)測(cè)量樣品在特定波長(zhǎng)下的吸光度,可以反推樣品的濃度。對(duì)于已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品,可以建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而實(shí)現(xiàn)未知樣品的定量分析。
GENESYS 180分光光度計(jì)提供多種測(cè)量模式,以適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)需求。常見的測(cè)量模式包括:
在單波長(zhǎng)模式下,儀器會(huì)選擇一個(gè)固定的波長(zhǎng)來(lái)進(jìn)行測(cè)量。該模式適用于對(duì)特定波長(zhǎng)處吸光度敏感的物質(zhì)進(jìn)行分析。比如,某些化學(xué)反應(yīng)或物質(zhì)在特定波長(zhǎng)下的吸收具有特征性,適合通過(guò)單波長(zhǎng)模式進(jìn)行定性分析。
在全波長(zhǎng)掃描模式下,GENESYS 180會(huì)在設(shè)定的波長(zhǎng)范圍內(nèi)逐步掃描,記錄每個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度。用戶可以通過(guò)掃描結(jié)果得到樣品在不同波長(zhǎng)下的吸光特性。這種模式對(duì)于研究樣品的光譜特性,尤其是多組分樣品的分析非常有效。
多波長(zhǎng)模式下,用戶可以設(shè)定多個(gè)波長(zhǎng)同時(shí)進(jìn)行測(cè)量,這對(duì)于需要在多個(gè)波長(zhǎng)下獲取數(shù)據(jù)的實(shí)驗(yàn)非常重要。通過(guò)多波長(zhǎng)模式,可以提高實(shí)驗(yàn)效率,適用于需要比較不同波長(zhǎng)數(shù)據(jù)的實(shí)驗(yàn),尤其是在分析混合物時(shí)非常有用。
動(dòng)力學(xué)模式適用于測(cè)量樣品在反應(yīng)過(guò)程中的吸光度變化。例如,化學(xué)反應(yīng)中的濃度變化、酶促反應(yīng)的速率等。這種模式下,GENESYS 180可以實(shí)時(shí)記錄吸光度隨時(shí)間的變化,進(jìn)而分析反應(yīng)速率和動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
GENESYS 180分光光度計(jì)具有廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域,尤其在化學(xué)分析、生物分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)和質(zhì)量控制等領(lǐng)域中具有重要作用。通過(guò)其精準(zhǔn)的測(cè)量原理和多種測(cè)量模式,GENESYS 180能夠?yàn)楦黝惙治鎏峁┛煽康臄?shù)據(jù)支持。
在化學(xué)分析中,GENESYS 180常用于定量分析,幫助研究人員測(cè)量溶液中物質(zhì)的濃度。通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,GENESYS 180可以根據(jù)吸光度計(jì)算樣品中目標(biāo)物質(zhì)的濃度。這在藥物分析、食品添加劑檢測(cè)、化學(xué)試劑分析等方面都有廣泛應(yīng)用。
在生物學(xué)研究和制藥工業(yè)中,GENESYS 180可用于測(cè)量生物樣品中蛋白質(zhì)、DNA/RNA、酶等生物分子的濃度。通過(guò)測(cè)量特定波長(zhǎng)下的吸光度,可以快速獲得目標(biāo)物質(zhì)的定量信息,且無(wú)需復(fù)雜的前處理。
GENESYS 180也常用于環(huán)境監(jiān)測(cè),尤其是在水質(zhì)分析和空氣污染監(jiān)測(cè)中。通過(guò)測(cè)量水樣或空氣中的污染物濃度,幫助研究人員評(píng)估環(huán)境污染的嚴(yán)重性,并采取相應(yīng)的措施。
在食品行業(yè)中,GENESYS 180可以用于檢測(cè)食品中的添加劑、色素、重金屬等成分。通過(guò)測(cè)量吸光度,可以確保食品符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),并防止有害物質(zhì)的污染。
賽默飛GENESYS 180分光光度計(jì)通過(guò)先進(jìn)的分光光度計(jì)原理和技術(shù),為科研、工業(yè)生產(chǎn)和環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域提供了可靠的分析工具。基于比爾-蘭伯特定律,該設(shè)備能夠精確地測(cè)量樣品的吸光度,并根據(jù)吸光度與濃度的線性關(guān)系,幫助用戶實(shí)現(xiàn)高效的定量分析。無(wú)論是在化學(xué)分析、生物分析,還是在環(huán)境檢測(cè)、質(zhì)量控制中,GENESYS 180都能發(fā)揮重要作用。通過(guò)了解其測(cè)量原理,用戶能夠更好地掌握其操作技巧,從而更好地利用該設(shè)備進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究和數(shù)據(jù)分析。