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廠家長(zhǎng)沙實(shí)了個(gè)驗(yàn)儀器制造有限公司，質(zhì)保3年只換不修。
以下為 Bio?Rad 型號(hào) 1652100（MicroPulser Electroporator）電穿孔設(shè)備在細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中的全面使用指南。內(nèi)容涵蓋產(chǎn)品概述、設(shè)備安裝與準(zhǔn)備、細(xì)胞培養(yǎng)前的樣品準(zhǔn)備、參數(shù)設(shè)定與電穿孔操作流程、轉(zhuǎn)化后細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)、典型應(yīng)用提示、維護(hù)保養(yǎng)與常見(jiàn)故障排查。為保證操作規(guī)范、實(shí)驗(yàn)成功率及設(shè)備壽命，請(qǐng)嚴(yán)格按照以下步驟執(zhí)行。
型號(hào) 1652100 是 Bio-Rad 推出的 MicroPulser Electroporator 電穿孔儀，專(zhuān)為細(xì)胞、微生物、電穿孔轉(zhuǎn)化設(shè)計(jì)。
其主要特點(diǎn)包括：
單鍵式脈沖觸發(fā)、附載電擊比色皿槽，操作簡(jiǎn)單。
預(yù)設(shè)優(yōu)化程序（5 種細(xì)菌＋5 種真菌）便于快速實(shí)驗(yàn)啟動(dòng)。
電弧抑制系統(tǒng)（Arc Quench）減少電弧發(fā)生，保護(hù)貴重樣本。
寬參數(shù)可調(diào)：輸出電壓可達(dá) 3000 V，輸出電流峰值超 100 A，可手動(dòng)調(diào)節(jié)電壓、脈沖寬度。
體積小巧（約 29×21×8 cm）、重量約 2.9 kg，實(shí)驗(yàn)室空間占用少。
應(yīng)用范圍：適用于細(xì)菌（如 E. coli）、酵母、其他微生物體，亦可擴(kuò)展至某些較易轉(zhuǎn)化的真核細(xì)胞系。尤其適合研究實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)轉(zhuǎn)化、電穿孔實(shí)驗(yàn)。
將設(shè)備放置在穩(wěn)固、水平、無(wú)振動(dòng)、無(wú)液體濺落的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面。
確保設(shè)備良好接地，以避免靜電或電擊風(fēng)險(xiǎn)。
電源要求：輸入為 100-120 V 或 220-240 V，50/60 Hz。
在通電前，確認(rèn)比色皿槽、連接導(dǎo)線、外殼無(wú)破損、無(wú)松脫。
建議操作溫度范圍約 3.5 ℃ 至 35 ℃。
避免在高濕、易結(jié)露或含塵環(huán)境中使用，以免影響電極性能或產(chǎn)生電弧。
操作時(shí)請(qǐng)穿戴標(biāo)準(zhǔn)生物安全防護(hù)裝備（實(shí)驗(yàn)服、護(hù)目鏡、手套），并在無(wú)人員或無(wú)電源侵入的情況下進(jìn)行電擊操作。
每次操作前務(wù)必檢查電擊比色皿是否配裝正確、無(wú)裂痕、無(wú)殘液、無(wú)氣泡；如發(fā)現(xiàn)異常請(qǐng)立刻更換。
接通電源，開(kāi)啟設(shè)備。設(shè)備進(jìn)行內(nèi)置自檢，包括電壓、電阻、時(shí)間常數(shù)等系統(tǒng)狀態(tài)。
確認(rèn)顯示屏讀取正常，無(wú)報(bào)警或閃爍提示。
若設(shè)備有預(yù)設(shè)程序功能，可先選擇一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)程序（例如細(xì)菌 E. coli 轉(zhuǎn)化程序）進(jìn)行一空白測(cè)試，確保輸出規(guī)格正常。
對(duì)于電穿孔轉(zhuǎn)化而言，細(xì)胞應(yīng)處于最佳生長(zhǎng)狀態(tài)：細(xì)菌處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，酵母或真核細(xì)胞亦應(yīng)為活躍增殖期。
轉(zhuǎn)化效率與細(xì)胞狀態(tài)高度相關(guān)：細(xì)胞密度、活力、外源物質(zhì)純度均為關(guān)鍵因素。
若使用大腸桿菌 (E. coli) 等，建議用新鮮制備的電 competent 細(xì)胞，低溫保存，并盡快使用。
使用無(wú)離子、高純度的電穿孔緩沖液或自配含低鹽、無(wú)鈣鎂離子的緩沖體系，避免高離子強(qiáng)度引起電弧。
洗滌細(xì)胞：將培養(yǎng)細(xì)胞離心后，棄上清，用冷卻緩沖液重懸洗滌 1-2 次，以去除殘余培養(yǎng)基中的鹽分與蛋白。
最終重懸至合適體積（例如 50 μL-100 μL）—具體視細(xì)胞密度與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)而定。
加入外源 DNA/RNA 或蛋白復(fù)合物時(shí)，確保無(wú)氣泡，且混合均勻。避免在比色皿中留大氣泡，因?yàn)闅馀菘赡軐?dǎo)致電弧。
比色皿 (electroporation cuvette) 的選擇也很關(guān)鍵：可選配 0.1 cm、0.2 cm、0.4 cm 間隙，根據(jù)樣品體積與類(lèi)型選擇。
將重懸細(xì)胞與外源物質(zhì)混合后，轉(zhuǎn)移至冷卻后的比色皿中（如 4 ℃冰上預(yù)冷 5-10 min）。
裝入體積應(yīng)適合比色皿規(guī)格，例如對(duì)于 0.2 cm 間隙比色皿，常見(jiàn)體積為 40-80 μL。
檢查液面是否與電極頂端齊平，確保無(wú)氣泡。若有氣泡應(yīng)輕輕顛管或離心，以去除。
將比色皿插入設(shè)備卡槽，確保接觸良好、固定牢靠。
該設(shè)備主要輸出 指數(shù)衰減波（exponential decay） 模式，適用于細(xì)菌、酵母等原核或微生物體。
根據(jù)樣品類(lèi)型，也可選擇或手動(dòng)調(diào)整電壓、時(shí)間常數(shù)以及電容參數(shù)。設(shè)備支持手動(dòng)優(yōu)化。
電壓 (Voltage)：根據(jù)比色皿間隙及細(xì)胞類(lèi)型設(shè)定。例如：對(duì)于 0.2 cm 間隙的細(xì)菌轉(zhuǎn)化常見(jiàn)電壓約 1500–2500 V，但具體需實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。
時(shí)間常數(shù)/脈沖時(shí)間 (Time constant / Pulse width)：一般設(shè)定在 1.0-4.0 ms 范圍內(nèi)，精度為 0.1 ms。
預(yù)設(shè)程序：設(shè)備內(nèi)置少量預(yù)設(shè)，可快速選擇細(xì)菌或真菌標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化程序，便于操作。
手動(dòng)模式：若為特殊細(xì)胞系、或較大體積比色皿，可手動(dòng)設(shè)定電壓至 3000 V 以上，以提高轉(zhuǎn)化效率（但應(yīng)遵循細(xì)胞耐受范圍）。
將插入好的比色皿定位在設(shè)備插槽中，蓋好保護(hù)蓋（若設(shè)備配備）。
在設(shè)備界面中選擇預(yù)設(shè)程序，或進(jìn)入手動(dòng)設(shè)定界面，輸入所需電壓及時(shí)間常數(shù)。
確認(rèn)所有參數(shù)無(wú)誤后，按下 “Pulse” 啟動(dòng)鍵，設(shè)備將充電并釋放脈沖。脈沖結(jié)束后，設(shè)備顯示實(shí)際電壓、時(shí)間常數(shù)等數(shù)據(jù)，供記錄和重復(fù)性分析。
操作完成后，立即將比色皿從槽位移出，迅速將樣品轉(zhuǎn)移至預(yù)熱恢復(fù)培養(yǎng)液中，以降低應(yīng)激并提高存活率。
記錄每次實(shí)驗(yàn)參數(shù)（電壓、時(shí)間常數(shù)、樣品體積、細(xì)胞濃度等）以及轉(zhuǎn)化效率、存活率數(shù)據(jù)，以便后續(xù)優(yōu)化。
若出現(xiàn)“電?。ˋrc）”警報(bào)或火花、樣品燒焦，則應(yīng)立即停止并分析原因。常見(jiàn)原因包括：液體中氣泡、太高離子強(qiáng)度、液體體積過(guò)多、比色皿間隙不匹配。
若細(xì)胞活率低但轉(zhuǎn)化效率也低，可能因細(xì)胞狀態(tài)欠佳，建議優(yōu)化細(xì)胞培育方法、降低電壓或脈沖時(shí)間。
若轉(zhuǎn)化效率不高但存活率高，建議適當(dāng)提高電壓或延長(zhǎng)脈沖寬度，但謹(jǐn)慎以免損害細(xì)胞。
比色皿質(zhì)量、預(yù)冷狀態(tài)、操作速度、恢復(fù)步驟等均會(huì)顯著影響最終結(jié)果。每一步都不可忽視。
電穿孔結(jié)束后應(yīng)立即將細(xì)胞加入或轉(zhuǎn)移至預(yù)熱（通常 37 ℃）含血清或相應(yīng)恢復(fù)培養(yǎng)液中。時(shí)間越快越有利于細(xì)胞存活。
對(duì)于細(xì)菌或酵母，可加入適當(dāng)恢復(fù)液（如 SOC 培養(yǎng)基）并在非抗選擇條件下短暫培養(yǎng)（如 20-30 分鐘）以恢復(fù)細(xì)胞膜完整性。
對(duì)于真核細(xì)胞或懸浮細(xì)胞，建議將細(xì)胞輕輕回收、置于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于適宜 CO? 埵育箱中進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)。
轉(zhuǎn)化后建議適度降低培養(yǎng)應(yīng)激：初始培養(yǎng)可縮短抗生素篩選時(shí)間，給予細(xì)胞適應(yīng)期。
對(duì)于細(xì)菌/酵母轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后可直接鋪板于選擇性平板（含抗生素）測(cè)定轉(zhuǎn)化陽(yáng)性克隆數(shù)。
對(duì)于真核細(xì)胞，應(yīng)在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)內(nèi)觀察細(xì)胞形態(tài)、存活率、熒光/報(bào)告基因表達(dá)情況。記錄數(shù)據(jù)。
若轉(zhuǎn)化效率高，但細(xì)胞形態(tài)異?；蚧钚越档?，需確認(rèn)電穿孔參數(shù)是否超出細(xì)胞耐受范圍或復(fù)蘇步驟是否及時(shí)。
建議記錄如下變量：細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞濃度、外源物質(zhì)量（DNA/RNA/蛋白）、比色皿規(guī)格、電壓、時(shí)間常數(shù)、恢復(fù)培養(yǎng)條件、轉(zhuǎn)化效率（陽(yáng)性克隆數(shù)／總細(xì)胞數(shù)）、細(xì)胞存活率。
通過(guò)多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，分析哪些參數(shù)對(duì)效率影響最大（如電壓、脈沖時(shí)間、細(xì)胞濃度、緩沖液成分）。制定優(yōu)化方案。
在重復(fù)實(shí)驗(yàn)中建議只變動(dòng)一個(gè)參數(shù)，其余保持恒定，以便分析因果關(guān)系。
雖然 1652100 型號(hào)主要設(shè)計(jì)用于微生物（細(xì)菌、酵母等）轉(zhuǎn)化，但在某些條件下亦可嘗試用于真核細(xì)胞簡(jiǎn)易轉(zhuǎn)導(dǎo)，前提是細(xì)胞類(lèi)型較為易于電穿孔且已針對(duì)參數(shù)優(yōu)化。以下為典型提示：
對(duì)于 E. coli：可選 0.1 cm 或 0.2 cm 間隙比色皿、初始電壓約 1500-2500 V、脈沖時(shí)間 ~2-4 ms。
對(duì)于酵母（如 S. cerevisiae）：建議用 0.2 cm 間隙比色皿、電壓略高于細(xì)菌、優(yōu)化時(shí)間常數(shù)。
對(duì)于真核細(xì)胞（若嘗試）：建議先做小體積試驗(yàn)、選用預(yù)冷細(xì)胞、優(yōu)化脈沖條件、重點(diǎn)觀察存活率。
若使用大體積比色皿（如 0.4 cm 間隙），可考慮將電壓提高至接近設(shè)備極限（如接近 3000 V），但必須保證細(xì)胞耐受，并嚴(yán)格控制氣泡與鹽離子強(qiáng)度。
每次實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)保存“有效參數(shù)檔案”，便于今后同類(lèi)型細(xì)胞重復(fù)使用。
每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，斷開(kāi)設(shè)備電源，并將比色皿槽、電極接觸面用無(wú)纖維脫落的布擦拭干凈，確保無(wú)液體殘留。
定期檢查電擊槽內(nèi)比色皿插槽是否干凈、無(wú)腐蝕或酸堿殘留。若發(fā)現(xiàn)電極表面腐蝕或損壞，應(yīng)及時(shí)更換。
若設(shè)備長(zhǎng)時(shí)間不使用，建議覆蓋防塵罩，放于干燥環(huán)境，并斷開(kāi)電源。
切勿使用腐蝕性強(qiáng)或含金屬顆粒的溶液直接裝入比色皿電擊，以避免損壞設(shè)備。
建議每年度或每頻繁使用后進(jìn)行一次系統(tǒng)校準(zhǔn)，檢查輸出電壓、時(shí)間常數(shù)與設(shè)備內(nèi)部顯示是否一致。
在校準(zhǔn)或維護(hù)中，建議記錄基線測(cè)量結(jié)果，作為設(shè)備性能追蹤依據(jù)。
若設(shè)備已使用多年或脈沖數(shù)已大，建議與廠商/代理商商議更換電容、電極模塊、內(nèi)部板卡等，以維持性能。
| 故障現(xiàn)象 | 可能原因 | 建議措施 |
|---|---|---|
| 出現(xiàn)電?。盎鸹?/td> | 液體中有氣泡、離子強(qiáng)度過(guò)高、比色皿不匹配、液體體積過(guò)大 | 更換比色皿、減少體積、去氣泡、降低離子強(qiáng)度 |
| 轉(zhuǎn)化效率低 | 細(xì)胞狀態(tài)差、外源物質(zhì)量差、電壓或時(shí)間常數(shù)不合適 | 優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)、提高DNA純度、調(diào)整電壓／時(shí)間常數(shù) |
| 細(xì)胞死亡率高 | 電壓過(guò)高、脈沖過(guò)長(zhǎng)、復(fù)蘇處理不及時(shí) | 降低電壓／時(shí)間常數(shù)、縮短脈沖、加快復(fù)蘇 |
| 設(shè)備不工作／無(wú)法觸發(fā)脈沖 | 參數(shù)未設(shè)定或模式未選擇、插槽接觸不良、電源故障 | 檢查參數(shù)設(shè)定、重新插拔比色皿、檢查電源和連接線 |
| 輸出電壓偏離設(shè)定值 | 電源不穩(wěn)定、電極疲勞、電氣元件老化 | 檢查電源、替換電極、與服務(wù)商聯(lián)系進(jìn)行維修或校準(zhǔn) |
總而言之，型號(hào) 1652100 的 MicroPulser 電穿孔儀是一款操作簡(jiǎn)便、性能穩(wěn)定、適用于微生物及部分簡(jiǎn)單真核細(xì)胞轉(zhuǎn)化的儀器。其優(yōu)勢(shì)包括預(yù)設(shè)程序、寬參數(shù)設(shè)定、強(qiáng)大電壓輸出及可靠操作界面。對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，按照以上流程規(guī)范操作，從細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)、樣品裝載、參數(shù)優(yōu)化、復(fù)蘇培養(yǎng)，到維護(hù)保養(yǎng)，均可有效提升實(shí)驗(yàn)成功率，延長(zhǎng)設(shè)備壽命。
建議使用者在初次上手時(shí)，先從設(shè)備預(yù)設(shè)程序和標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞樣本入手，記錄參數(shù)與結(jié)果，逐步積累經(jīng)驗(yàn)。隨著實(shí)驗(yàn)積累，可探索更復(fù)雜細(xì)胞系或更大體積轉(zhuǎn)化。設(shè)備雖小，但細(xì)節(jié)不可忽視：務(wù)必控制細(xì)胞狀態(tài)、緩沖體系、氣泡、比色皿規(guī)格、電壓時(shí)間等要素。穩(wěn)定操作、數(shù)據(jù)記錄與優(yōu)化反饋，將是高效實(shí)驗(yàn)運(yùn)行的關(guān)鍵。
若您后續(xù)需要“打印版操作手冊(cè)”、或“針對(duì)某細(xì)胞系（如大腸桿菌、酵母、HEK293）推薦參數(shù)和操作流程”，歡迎隨時(shí)告知，我可進(jìn)一步協(xié)助提供。
杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
