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質(zhì)保3年只換不修，廠家長沙實(shí)了個(gè)驗(yàn)儀器制造有限公司

一、概述

伯樂電穿孔儀 165-2661 是一種高精度、高安全性電擊轉(zhuǎn)化設(shè)備，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細(xì)胞工程、基因?qū)搿⒌鞍走f送以及藥物載體研究等實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域。
其操作流程涵蓋樣品準(zhǔn)備、參數(shù)設(shè)定、電擊執(zhí)行、數(shù)據(jù)記錄與設(shè)備維護(hù)等多個(gè)階段。
規(guī)范操作不僅能保證實(shí)驗(yàn)成功率，還能延長儀器使用壽命并保障操作安全。

本指南詳細(xì)闡述165-2661的標(biāo)準(zhǔn)操作流程、關(guān)鍵步驟、注意事項(xiàng)及實(shí)驗(yàn)優(yōu)化方法，為科研人員提供可直接執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)化參考。

二、操作前準(zhǔn)備

1. 實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求

• 室溫保持在 20–25 ℃，相對濕度 ≤ 70%；

• 臺(tái)面應(yīng)平整、干燥、防靜電；

• 周圍避免放置高頻電磁設(shè)備；

• 保證良好通風(fēng)，防止高壓放電產(chǎn)生臭氧積聚；

• 照明充足，便于觀察樣品狀態(tài)。

2. 儀器檢查

開機(jī)前依次完成以下檢查：

1. 檢查電源線連接牢固，接地線無損；

2. 電源規(guī)格：AC 220 V ±10%，50/60 Hz；

3. 觀察 ShockPod 電擊槽干燥、清潔、無鹽漬；

4. 電擊杯無裂痕、無殘留液體；

5. 控制面板按鍵靈敏、顯示正常；

6. 風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)平穩(wěn)、通風(fēng)口無堵塞；

7. 接通電源后系統(tǒng)自動(dòng)自檢，顯示 SELF TEST PASSED；

8. 若出現(xiàn) FAULT 或報(bào)警聲，立即停止操作并檢查模塊。

3. 樣品準(zhǔn)備

（1）細(xì)胞制備

• 取對數(shù)生長期細(xì)胞，保證細(xì)胞活性高；

• 采用去離子水或低離子緩沖液（如無鹽HEPES緩沖液）洗滌三次；

• 最后以低導(dǎo)電緩沖液重懸，電導(dǎo)率控制在 0.5–1.5 mS/cm；

• 細(xì)胞濃度參考：

• E. coli：約 1×10? cells/mL

• 酵母：約 1×10? cells/mL

• 哺乳動(dòng)物細(xì)胞：約 10?–10? cells/mL

（2）外源DNA/RNA制備

• DNA應(yīng)高純度、無蛋白或鹽分污染；

• 體積一般為 1–5 μL；

• 建議預(yù)冷至 4 ℃ 備用。

（3）樣品預(yù)冷

• 細(xì)胞懸液與電擊杯一并置于冰上 10 分鐘；

• 有助于減少熱損傷，提高細(xì)胞存活率。

三、開機(jī)與系統(tǒng)初始化

1. 打開電源開關(guān)，儀器自動(dòng)檢測高壓模塊、電容、電阻與溫控系統(tǒng)；

2. 顯示屏出現(xiàn)主菜單，默認(rèn)顯示上次使用參數(shù)；

3. READY 指示燈亮起，表示系統(tǒng)處于待機(jī)狀態(tài)；

4. 若出現(xiàn)異常信息（如過溫、蓋鎖未閉合），根據(jù)提示排查后重新啟動(dòng)。

四、參數(shù)設(shè)置流程

1. 進(jìn)入操作菜單

按 “MENU” 鍵進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置界面，可選擇：

• Manual Setup：手動(dòng)設(shè)定實(shí)驗(yàn)參數(shù)；

• Preset Protocol：調(diào)用已保存方案。

2. 設(shè)置關(guān)鍵參數(shù)

設(shè)置完成后按 “SAVE” 保存方案，以便重復(fù)實(shí)驗(yàn)調(diào)用。

五、樣品裝載步驟

1. 選用匹配電擊杯：

• 0.1 cm 間距：高電壓、小體積；

• 0.2 cm 間距：常用通用型；

• 0.4 cm 間距：適合動(dòng)物細(xì)胞。

2. 將樣品液體吸入電擊杯，體積為推薦容量的 70–80%；

3. 檢查是否有氣泡，如有可輕拍去除；

4. 用無絨紙擦拭外壁殘液，防止短路；

5. 將電擊杯放入 ShockPod 槽內(nèi)；

6. 輕壓蓋子直至“咔噠”聲，系統(tǒng)檢測蓋鎖閉合并顯示 “LID CLOSED”。

六、電擊執(zhí)行流程

步驟 1：充電準(zhǔn)備

• 按下 “PULSE” 鍵開始充電；

• 屏幕提示 “CHARGING …”；

• 當(dāng)電壓達(dá)到設(shè)定值，顯示 “READY TO PULSE”。

步驟 2：執(zhí)行放電

• 按 “ENTER” 鍵觸發(fā)電擊；

• 屏幕實(shí)時(shí)顯示放電電壓、電流及時(shí)間常數(shù) τ；

• 放電持續(xù)數(shù)毫秒后自動(dòng)結(jié)束；

• 狀態(tài)顯示 “COMPLETE”；

• 系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行放電能量釋放與冷卻（約 10 秒）。

步驟 3：結(jié)束提示

• READY 燈重新亮起，表示放電完成；

• 可安全打開蓋子并取出電擊杯。

七、樣品回收與培養(yǎng)

1. 待 10 秒確認(rèn)無殘余電壓后取出電擊杯；

2. 立即將樣品加入恢復(fù)培養(yǎng)基中；

3. 輕輕混勻避免劇烈振蕩；

4. 按下表進(jìn)行培養(yǎng)恢復(fù)：

八、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄

1. 自動(dòng)數(shù)據(jù)采集

每次放電后，系統(tǒng)自動(dòng)記錄：

• 實(shí)際電壓、電容、電阻；

• 時(shí)間常數(shù) τ；

• 能量釋放率（%）；

• 放電次數(shù)與波形類型；

• 模塊溫度與日期。

2. 數(shù)據(jù)導(dǎo)出

• 插入 USB 存儲(chǔ)設(shè)備；

• 菜單選擇 “Data → Export”；

• 系統(tǒng)生成 .csv 文件；

• 文件名含實(shí)驗(yàn)日期與編號，可在 Excel 中查看。

3. 數(shù)據(jù)分析要點(diǎn)

• 比較設(shè)定與實(shí)測電壓偏差（應(yīng) ≤2%）；

• 計(jì)算時(shí)間常數(shù) τ 是否符合目標(biāo)范圍（4–8 ms 為最佳）；

• 檢查能量釋放是否正常（≥90%）；

• 異常數(shù)據(jù)應(yīng)記錄備注原因。

九、安全規(guī)范

1. 操作前確認(rèn)蓋鎖閉合；

2. 放電過程中嚴(yán)禁觸碰 ShockPod；

3. 樣品不得含鹽或?qū)щ婋s質(zhì)；

4. 放電后等待 10 秒再取樣；

5. 嚴(yán)禁連續(xù)多次放電，間隔 ≥10 秒；

6. 儀器周圍保持干燥無液體；

7. 遇異常（如閃光、異味、噪音）立即斷電；

8. 不得在開啟蓋子的狀態(tài)下充電或放電；

9. 維修或校準(zhǔn)必須由專業(yè)人員進(jìn)行。

十、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的清理與維護(hù)

1. 日常清理

• 關(guān)閉電源，等待系統(tǒng)放電完成；

• 拔掉電源線；

• 用無水乙醇擦拭 ShockPod 內(nèi)部及電擊杯表面；

• 干燥后放置在無塵環(huán)境中。

2. 定期維護(hù)

3. 儲(chǔ)存條件

• 環(huán)境溫度 10–35 ℃；

• 相對濕度 ≤ 70%；

• 遠(yuǎn)離陽光直射與腐蝕性氣體；

• ShockPod 與電擊杯單獨(dú)密封保存。

十一、常見問題與排查

十二、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程（SOP總結(jié)）

標(biāo)準(zhǔn)八步法：

1. 設(shè)備檢查
   檢查電源、接地、ShockPod、電擊杯狀態(tài)。

2. 樣品準(zhǔn)備
   去鹽、預(yù)冷、濃度調(diào)整、排氣泡。

3. 參數(shù)設(shè)定
   設(shè)置電壓、電容、波形等實(shí)驗(yàn)參數(shù)。

4. 樣品裝載
   加入樣品、放入 ShockPod、鎖定蓋。

5. 放電執(zhí)行
   按“PULSE”充電、“ENTER”放電。

6. 樣品回收
   放電后 10 秒取樣，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液。

7. 數(shù)據(jù)記錄
   自動(dòng)保存并導(dǎo)出實(shí)驗(yàn)參數(shù)。

8. 清理維護(hù)
   關(guān)閉電源、擦拭清潔、檢查狀態(tài)。

十三、操作注意與優(yōu)化建議

1. 電場均勻性
   樣品應(yīng)充滿電極間隙但不溢出。

2. 溫度控制
   預(yù)冷樣品可降低電擊熱損傷。

3. 氣泡控制
   排氣泡以防電弧導(dǎo)致樣品死亡。

4. 間隔放電
   連續(xù)實(shí)驗(yàn)需間隔 ≥10 秒。

5. 數(shù)據(jù)分析
   每次實(shí)驗(yàn)記錄 τ 值與能量，判斷系統(tǒng)穩(wěn)定性。

6. 多體系優(yōu)化
   建議針對不同細(xì)胞類型單獨(dú)建立參數(shù)數(shù)據(jù)庫。

十四、操作實(shí)例

示例 1：大腸桿菌電轉(zhuǎn)化

• 電擊杯間距：0.2 cm

• 電壓：2000 V

• 電容：25 μF

• 電阻：200 Ω

• 時(shí)間常數(shù)：約 4.8 ms

• 成功率：約 90–95%

示例 2：CHO 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

• 電擊杯間距：0.4 cm

• 電壓：650 V

• 電容：800 μF

• 波形：方波，2 次脈沖

• 成功率：約 80–85%，細(xì)胞存活率高。

十五、結(jié)果記錄與報(bào)告要求

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)完成以下記錄：

• 樣品編號、體系類型；

• 電壓、電容、時(shí)間常數(shù)；

• 能量釋放率、放電次數(shù)；

• 細(xì)胞狀態(tài)、陽性率或轉(zhuǎn)化效率；

• 操作人員、日期與備注。

報(bào)告應(yīng)保存電子版與紙質(zhì)版，便于溯源。