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伯樂（Bio-Rad）Genepulser Xcell 電穿孔儀是一款高度可靠的電轉(zhuǎn)化設(shè)備，廣泛應(yīng)用于細胞轉(zhuǎn)染、基因?qū)?、RNA干擾、蛋白質(zhì)遞送等多個研究領(lǐng)域。通過對電場和脈沖波形的精確控制，Genepulser Xcell 可以高效、安全地導(dǎo)入外源物質(zhì)，如DNA、RNA或蛋白質(zhì)，為科學(xué)實驗提供可靠的技術(shù)保障。
在使用 Genepulser Xcell 電穿孔儀時，遵循規(guī)范的操作步驟對于確保實驗的成功、減少細胞損傷以及提升轉(zhuǎn)化效率至關(guān)重要。本文將詳細介紹 Genepulser Xcell 電穿孔儀的標準操作步驟，從準備工作、設(shè)備設(shè)置、樣品處理到實驗完成后的操作，確保每一個環(huán)節(jié)都符合最佳操作實踐。
在開始實驗前，首先確保實驗室環(huán)境滿足設(shè)備運行要求：
電源與接地：確保設(shè)備連接到穩(wěn)定的220V電源，并且接地良好。接地電阻應(yīng)小于1Ω，以確保電氣安全。
溫度與濕度：環(huán)境溫度應(yīng)控制在20℃至25℃之間，濕度不超過70%。過高的溫度和濕度可能影響設(shè)備的運行和細胞轉(zhuǎn)染效果。
設(shè)備檢查：
確保電穿孔儀的外殼沒有損壞，所有接口完整；
檢查電極、電源線及接地線無損壞，連接牢固；
檢查設(shè)備的顯示屏、按鈕是否正常，確保無異常故障。
設(shè)備啟動前，需要進行自檢，確認系統(tǒng)狀態(tài)為“OK”后，才能繼續(xù)進行實驗。
電穿孔實驗中，樣品準備至關(guān)重要。樣品的濃度、緩沖液選擇以及處理方式都將直接影響轉(zhuǎn)化效果。
細胞類型：確保選擇適合電穿孔的細胞類型。常見的細胞類型包括大腸桿菌、酵母細胞、哺乳動物細胞等。每種細胞類型對電場強度和脈沖時間的要求不同。
細胞狀態(tài)：使用對數(shù)生長期的細胞，活細胞轉(zhuǎn)染效率較高。細胞應(yīng)在短時間內(nèi)用無離子緩沖液（如HEPES緩沖液）洗滌，去除培養(yǎng)基中的離子。
細胞濃度：常見濃度為10^7–10^8個細胞/mL，避免過稀或過濃的細胞懸液。
DNA/RNA質(zhì)量：樣品應(yīng)純度高，濃度適中。通常DNA濃度控制在50–100 ng/μL，RNA濃度保持在100–200 ng/μL之間。
緩沖液選擇：使用低導(dǎo)電性緩沖液（如無Ca2?、Mg2?的HEPES緩沖液），避免離子濃度過高影響電穿孔效果。
選擇合適規(guī)格的電擊杯。常用的電擊杯間距為0.1 cm、0.2 cm和0.4 cm。不同間距適用于不同類型的細胞。
電擊杯需事先清潔，使用70%酒精擦拭并晾干，避免污染。
每次實驗使用新的電擊杯，確保樣品純凈無污染。
打開電源，等待設(shè)備完成自檢，顯示屏上會顯示“System OK”提示。
確認設(shè)備顯示“Ready to Start”狀態(tài)后，方可進行實驗操作。
根據(jù)實驗類型選擇相應(yīng)的模式，Genepulser Xcell 提供了多種預(yù)設(shè)模式，包括：
細菌轉(zhuǎn)化模式（E. coli Transformation）
酵母電轉(zhuǎn)化模式（Yeast Transformation）
哺乳動物細胞轉(zhuǎn)染模式（Mammalian Electroporation）
植物原生質(zhì)體模式（Plant Protoplast Mode）
細胞融合模式（Cell Fusion Mode）
選擇合適的模式后，設(shè)備會自動推薦適用的電壓和脈沖時間范圍，用戶可以根據(jù)實驗需求進行微調(diào)。
電壓范圍通常在10V到2500V之間，具體電壓取決于細胞類型和實驗需求。
對于大腸桿菌等細菌，一般選擇較高的電壓（1800V至2500V）；
對于哺乳動物細胞，建議電壓范圍為250V至850V。
脈沖時間通常設(shè)定為1–10 ms，時間過長可能會導(dǎo)致細胞死亡。對于不同類型的細胞，時間設(shè)置也有所不同。對于細菌，脈沖時間較短，而對于哺乳動物細胞，脈沖時間適當延長可以提高轉(zhuǎn)染效果。
若實驗需要多脈沖組合模式，用戶可以設(shè)定脈沖次數(shù)和間隔時間，通常設(shè)置脈沖間隔為1–2秒，防止細胞過熱。
設(shè)置完電壓、時間等參數(shù)后，可以選擇將實驗方案保存，以便下次直接調(diào)用。
將準備好的細胞懸液加入電擊杯中。每次加載的樣品體積通常為40–80μL，電擊杯的容量不可超過最大推薦值。
確保樣品沒有氣泡，可以輕輕拍打電擊杯底部來去除氣泡。氣泡會影響電場的均勻分布，導(dǎo)致實驗失敗。
將電擊杯插入電極槽，確保連接緊密，電極無松動。
確保電極與樣品完全接觸，避免接觸不良導(dǎo)致脈沖輸出不穩(wěn)定。
關(guān)閉安全蓋，系統(tǒng)會自動檢測蓋板是否鎖定。若蓋板未正確鎖定，設(shè)備會提示“Cover Not Closed”，并無法開始實驗。
在確認所有參數(shù)設(shè)置無誤后，按下“Start”按鈕，設(shè)備開始充電并自動放電。
顯示屏將實時顯示放電電壓、電流以及時間進度。
電壓和電流值會實時顯示在屏幕上。用戶可以觀察電壓是否穩(wěn)定，確保放電過程順利。
放電完成后，設(shè)備會自動提示“Pulse Complete”，并顯示本次實驗的參數(shù)與結(jié)果。
放電完成后，立即取出電擊杯，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至復(fù)蘇培養(yǎng)基中。
混合均勻并孵育10分鐘以幫助細胞恢復(fù)膜的完整性，之后可進行后續(xù)培養(yǎng)。
設(shè)備會自動記錄每次實驗的電壓、脈沖時間、電流等關(guān)鍵數(shù)據(jù)。實驗數(shù)據(jù)可以通過設(shè)備界面查看，或通過USB接口導(dǎo)出到外部存儲設(shè)備（如計算機）。
導(dǎo)出數(shù)據(jù)文件通常為CSV格式，可導(dǎo)入到數(shù)據(jù)分析軟件中進行統(tǒng)計分析。
數(shù)據(jù)包括實驗參數(shù)、放電時間、波形曲線等，幫助科研人員分析實驗的效果。
實驗結(jié)束后，用蒸餾水清洗電擊杯，并用70%酒精擦拭，確保沒有殘留樣品。
清潔電極表面，避免鹽分或其他污染物積聚。
用濕布清潔設(shè)備外部，確保無灰塵和污染物。
檢查設(shè)備接口是否松動，確保連接穩(wěn)固。
在長期不使用時，將設(shè)備斷電，并覆蓋防塵罩。
定期檢查設(shè)備狀態(tài)，確保設(shè)備正常工作。
操作人員應(yīng)佩戴防靜電手環(huán)，避免靜電損壞設(shè)備。
電壓較高時，避免直接觸摸電極或電擊杯。
若設(shè)備發(fā)生異常（如電弧、電壓波動），立即按下“Stop”按鈕停止操作。
出現(xiàn)故障時，及時聯(lián)系售后服務(wù)團隊進行排查。
避免將高濃度鹽溶液或高電導(dǎo)率緩沖液直接用于電穿孔實驗。
嚴格遵循實驗室生物安全標準處理廢棄物。
通過遵循上述標準操作步驟，用戶可以高效、安全地使用 Genepulser Xcell 電穿孔儀進行細胞轉(zhuǎn)化、基因?qū)氲葘嶒灐Ｃ總€環(huán)節(jié)的精細操作不僅有助于提高轉(zhuǎn)化效率，還能延長設(shè)備壽命。質(zhì)保期內(nèi)，設(shè)備由長沙實了個驗儀器制造有限公司提供“只換不修”服務(wù)，確保用戶在使用過程中的設(shè)備穩(wěn)定性與安全性。
借助這一強大且易用的設(shè)備，科研人員能夠更加精確、便捷地完成基因轉(zhuǎn)化、RNA干擾、蛋白質(zhì)遞送等研究任務(wù)，推動生命科學(xué)研究向更高水平發(fā)展。
