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質保3年只換不修，廠家長沙實了個驗儀器制造有限公司一、概述

伯樂電穿孔儀 165-2661 是一款專為基因轉化、分子導入和細胞電穿孔實驗設計的高性能儀器。
其核心運行原理是：通過在極短時間內(nèi)施加高壓電場，使細胞膜瞬時產(chǎn)生可逆微孔，從而讓外源 DNA、RNA、蛋白質或其他分子進入細胞內(nèi)部。

在運行過程中，165-2661 將高壓能量精確地儲存在電容中，并在控制系統(tǒng)指令下迅速釋放。
儀器內(nèi)置的自動校準、能量檢測與安全保護機制，使其能夠在高壓環(huán)境下安全、穩(wěn)定地工作。

正確掌握其運行方法，不僅能提高實驗成功率，還能最大限度延長設備壽命并確保操作者安全。

二、運行準備階段

1. 實驗環(huán)境要求

• 室溫控制在 20–25 ℃；

• 相對濕度 ≤ 70%；

• 工作臺平整、絕緣、防潮；

• 避免陽光直射與電磁干擾源；

• 周圍無易燃易爆物品。

2. 儀器檢查步驟

在運行前應逐項檢查：

1. 電源線與接地線連接穩(wěn)固；

2. ShockPod 電擊槽內(nèi)部干燥、無鹽漬或液體殘留；

3. 電擊杯表面清潔無裂痕；

4. 通風口暢通，風扇運轉正常；

5. 打開電源后系統(tǒng)自動自檢，屏幕顯示 “SELF TEST PASSED”；

6. 若出現(xiàn)報警代碼，應立即停止操作，查明原因。

3. 樣品與耗材準備

• 細胞樣品：處于對數(shù)生長期，活性高；

• 緩沖液：低離子強度（導電率 < 1.5 mS/cm），常用 10% 甘露醇或蔗糖緩沖液；

• 外源分子：高純度 DNA/RNA/蛋白，無鹽殘留；

• 電擊杯：按實驗類型選擇 0.1 cm、0.2 cm 或 0.4 cm 間距；

• 預冷步驟：樣品與電擊杯在冰上放置 5–10 分鐘，以降低熱損傷。

三、開機與系統(tǒng)初始化

1. 接通電源后，主機自動檢測高壓模塊、電容、電阻及蓋鎖狀態(tài)；

2. 屏幕進入主菜單界面，顯示上次使用參數(shù)；

3. 當指示燈由紅轉綠，表示系統(tǒng)處于 “READY” 狀態(tài)，可進行下一步操作。

初始化過程確保電路穩(wěn)定、參數(shù)準確，是運行前的必要步驟。

四、參數(shù)設置方法

1. 進入?yún)?shù)設置界面

按 “MENU” 鍵進入系統(tǒng)設置，選擇 Manual Setup（手動） 或 Preset Protocol（預設方案）。

2. 主要參數(shù)說明

3. 參數(shù)校驗

• 確認設定的電壓、電容值在儀器允許范圍內(nèi)；

• 電極間距與樣品體積匹配；

• 系統(tǒng)自動計算時間常數(shù) τ（τ = R × C），并在界面顯示。

4. 保存參數(shù)

按 “SAVE” 鍵，輸入實驗名稱（如 Ecoli-2000V-25uF），以便后續(xù)調(diào)用。

五、樣品裝載步驟

1. 將預冷細胞與外源 DNA 混勻；

2. 用無菌移液器吸取樣品注入電擊杯（約占 70–80% 體積）；

3. 輕輕敲擊杯壁排除氣泡；

4. 用干凈紗布擦拭杯外壁；

5. 將電擊杯放入 ShockPod 電極槽中；

6. 合上蓋鎖至“咔噠”定位，系統(tǒng)顯示 “LID CLOSED – READY TO RUN”。

此步驟確保電極接觸良好和安全閉鎖，防止放電異常。

六、運行與放電過程

1. 充電階段

• 按 “PULSE” 鍵啟動充電；

• 屏幕顯示 “CHARGING…”；

• 當達到設定電壓后，提示 “READY TO PULSE”。

2. 放電階段

• 按 “ENTER” 鍵執(zhí)行放電；

• 系統(tǒng)自動釋放儲能電容的能量；

• 屏幕顯示實際電壓、電流與時間常數(shù) τ；

• 放電持續(xù)時間通常為 4–8 ms；

• 放電結束后顯示 “COMPLETE” 并記錄數(shù)據(jù)。

3. 自動放電保護

實驗結束后，系統(tǒng)會自動在 5–10 秒內(nèi)釋放殘余電荷，確保操作安全。

七、樣品回收與培養(yǎng)

1. 放電結束后靜置 10 秒；

2. 打開蓋鎖，取出電擊杯；

3. 將樣品立即轉入適溫培養(yǎng)液中恢復。

恢復階段允許細胞修復膜結構并啟動基因表達。

八、實驗數(shù)據(jù)記錄

165-2661 自動記錄每次運行參數(shù)，包括：

• 設定電壓、電容、波形類型；

• 實際輸出電壓與電流；

• 時間常數(shù) τ；

• 能量釋放率（Energy Efficiency，%）；

• 實驗日期與編號。

數(shù)據(jù)導出步驟

1. 插入 USB 存儲設備；

2. 菜單選擇 “Data → Export”；

3. 選擇記錄批次；

4. 導出文件格式：.csv。

導出的文件可直接導入 Excel 進行統(tǒng)計分析與報告生成。

九、安全運行規(guī)范

1. 儀器運行前確保蓋鎖閉合；

2. 嚴禁觸摸 ShockPod 內(nèi)電極；

3. 樣品液體不得含鹽或氣泡；

4. 放電后需等待至少 10 秒再開蓋；

5. 操作時佩戴絕緣手套；

6. 若出現(xiàn)閃光、異味或異常聲響，立即斷電；

7. 避免連續(xù)高頻放電，防止電容過熱；

8. 操作完畢后關閉電源并拔掉插頭。

十、運行后的清理與維護

1. 清理步驟

• 關閉電源并等待放電完成；

• 使用無水乙醇或 70% 酒精擦拭 ShockPod 內(nèi)壁、電擊杯外部；

• 保持設備干燥；

• 每次實驗后檢查電極觸點是否氧化。

2. 定期維護

維護工作確保系統(tǒng)運行長期穩(wěn)定。

十一、運行中的常見問題

十二、運行優(yōu)化建議

1. 樣品導電率

• 維持在 0.5–1.5 mS/cm；導電性過高易引發(fā)電弧。

2. 電場強度

• 起始電壓取推薦值的 80%，逐步調(diào)整至最優(yōu)點。

3. 時間常數(shù)

• τ 控制在 4–8 ms 區(qū)間效果最佳。

4. 多脈沖運行

• 對哺乳動物細胞可使用 2–3 次脈沖模式，間隔 1 s。

5. 溫度控制

• 所有樣品與電擊杯預冷可減少熱效應。

6. 數(shù)據(jù)積累

• 建議建立參數(shù)數(shù)據(jù)庫，記錄轉化效率與細胞存活率的對應關系。

十三、運行性能驗證

每月進行一次性能驗證，確認系統(tǒng)輸出穩(wěn)定性。

1. 電壓驗證：輸出偏差 ≤ ±2%；

2. 時間常數(shù)驗證：與理論值差 ≤ 0.05 ms；

3. 能量釋放率：≥ 90%；

4. 重復放電穩(wěn)定性：100 次放電波動 < 1.5%。

若不符合要求，應執(zhí)行系統(tǒng)自動校準功能。

十四、運行邏輯簡述

165-2661 的整個運行流程可概括為八個步驟：

1. 系統(tǒng)自檢：啟動后檢測電路與溫度；

2. 參數(shù)設定：輸入電壓、電容、波形等；

3. 充電階段：電容儲能至目標值；

4. 狀態(tài)檢測：確保蓋鎖閉合、安全回路正常；

5. 放電執(zhí)行：觸發(fā)高壓脈沖；

6. 信號采集：記錄電壓曲線與 τ 值；

7. 數(shù)據(jù)存儲：保存實驗記錄；

8. 安全放電：自動釋放殘余電荷。

該流程完全由中央處理單元自動控制，保證每次運行精確一致。

十五、運行實例

實例 1：E. coli 質粒轉化

• 電壓：2000 V

• 電容：25 μF

• 電極間距：0.2 cm

• 時間常數(shù) τ ≈ 4.8 ms

• 成功率：> 90%

實例 2：CHO 細胞電穿孔

• 電壓：650 V

• 電容：800 μF

• 波形：方波 × 2 次 (間隔 1 s)

• 時間常數(shù) τ ≈ 7.2 ms

• 成功率：約 85%，細胞活性高。

這些實例說明正確運行可獲得高效率與高存活率的結果。

十六、運行安全要點

• 嚴格遵守操作規(guī)范，不擅自修改高壓參數(shù)；

• 不得在開蓋狀態(tài)下運行；

• 確保設備與操作者均良好接地；

• 使用絕緣工具處理電擊杯；

• 每次實驗結束后關閉電源并放電。

十七、長期運行與性能維護

165-2661 支持連續(xù)運行模式，適合高通量實驗。
但為保證穩(wěn)定性，應注意：

1. 每放電 20 次后暫停 2 分鐘降溫；

2. 每天工作結束后執(zhí)行一次空載測試；

3. 每月清潔電極觸點，防止氧化。

長期維護得當，儀器可連續(xù)穩(wěn)定工作超過 100 000 次放電周期。

十八、結果分析與反饋

運行結束后可利用導出的數(shù)據(jù)文件進行統(tǒng)計分析：

• 電壓與時間常數(shù)關系；

• 轉化效率與電場強度趨勢；

• 不同參數(shù)下的細胞存活率；

• 能量釋放曲線。

通過分析，可建立各體系的最優(yōu)運行條件庫，提高實驗可重復性。

十九、運行特點總結

1. 精確能量控制：電壓、電容雙重閉環(huán)調(diào)節(jié)；

2. 智能反饋機制：實時采集與自校準；

3. 多波形可選：指數(shù)衰減波與方波自由切換；

4. 高安全設計：蓋鎖保護、過壓報警、自動放電；

5. 強數(shù)據(jù)功能：自動記錄與導出；

6. 兼容多體系：適用于細菌、酵母、動物與植物細胞；

7. 穩(wěn)定可靠：長時間運行偏差極小。